MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒介绍

名称：MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

规格：2000T

保存：MTT溶液-20℃保存；Formazan溶解液室温或-20℃保存。

产品内容：

产品简介：

MTT 可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm 波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，活细胞越少，则吸光度越低。

使用说明：

1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，根据实验需求，调整细胞浓度，分于96 孔板。

2.置37℃、5%CO2 温箱培养。

3.加入适当浓度的受试化合物，继续培养适当时间。

4.加入20ul MTT 溶液，继续培养4 h。

5.每孔加入100微升Formazan溶解液，37℃摇床震荡（通常200rpm/min）。直至formazan全部溶解。通常2小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会长一些。（如果需要，也可以在加入溶解液后用排枪轻轻吹打使甲簪全部溶解）

6.在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片，可以使用560-600nm的滤光片。
7.同时设置调零孔（培养基、MTT、 Formazan 溶解液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、 Formazan 溶解液），每组设定3 复孔。

注意事项：

1.由于使用96 孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

2.MTT 溶液为黄色需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。Formazan 溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。

3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Formazan溶解液产品原理：

　　噻唑兰（Methylthiazoletetrazolium, MTT）是一种可接受氢离子的淡黄色唑氮盐染料，被活细胞线粒体呼吸链中的琥珀酸脱氢酶和细胞色素C还原，使tetrazolium环开裂，生成深紫色结晶产物甲簪（formazan）。死细胞因丧失琥珀酸脱氢酶活性，因此甲簪的生成量仅与活细胞数目成正比。在特定溶剂存在的情况下，甲簪可以被完全溶解，借助酶标仪测定570nm波长附近的吸光度，可推算出活细胞的数量或细胞存活率。细胞增殖速度越快，则甲簪生成的量越多，吸光度越高；细胞毒性越大，则甲簪生成的量越少，吸光度越低。MTT试验由于操作简便，成本低，不污染环境，克服了传统的同位素掺入或释放实验等操作复杂，成本高，对仪器设备和实验室条件要求高，难于防护等因素，而被广泛地用于细胞增殖和细胞毒性的检测。 但是，由于MTT试验中生成的深紫色结晶产物甲簪（formazan）难溶于水，必需离心后吸除培养液，加入DMSO或异丙醇等有机溶剂溶解后才能进行吸光度检测，在一定程度上限制了MTT试验的应用。

Formazan溶解液(Formazan Dissolving Solution)可以直接溶解培养液中的甲簪，无需离心吸除培养液，故可避免因操作中吸除了部分甲簪产物引起的操作误差，因此具有本底低，灵敏度高，线性范围宽，操作简便等特点。