DAB染色液 使用说明书

【产品名称】

DAB 染色液

【包装规格】

1000 次测试/盒。

【预期用途】

主要用于免疫组织化学染色的显色。

【检验原理】

DAB 染色液是特别敏感的二步法免疫组化试剂盒，适合与兔或鼠源一抗配用。其主要过程为，一抗与切片中的靶抗原形成抗原抗体复合物，酶标羊抗鼠/免 IgG 聚合物(以多聚葡聚糖分子为骨架，辣根过氧化物酶与羊抗鼠/兔 IgG 形成的聚合物)与抗原抗体复合物中的一抗结合，再利用辣根过氧化物酶催化二氨基联苯胺(DAB)在抗原部位形成棕色显色。

【组成成分】

【储存条件及有效期】

2-8°C保存，有效期 18 个月。初次开瓶后，2-8℃C储存，有效期3个月。

【适用仪器】

光学显微镜(20-80倍)

【所需的自备材料】

1、塑料染色缸、染色架

2、阴性和阳性对照(类型参照相应一抗说明书)

3、蒸馏水、酒精、二甲苯

4、浓缩型或即用型一抗

5、抗体稀释液

6、盐酸酒精溶液。

7、苏木素染液

8、中性树胶

9、盖玻片

【样本要求】

常规经福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片

【检验方法】

常规脱蜡水化:

将石蜡切片浸于二甲苯中5分钟，三次。取出切片置于100%无水乙醇中3分钟两次;依次置入90%-70%各级酒精各3分钟。用PBS或TBS冲洗3次，每次3分钟。

抗原修复:

参照一抗说明书进行抗原修复

DAB显色液配制:

DAB工作液需要在使用前进行配制，在配备的小试管中按每1毫升显色缓冲液(B液)中加入1ml DAB显色剂(A液)的比例配制DAB工作液，混后用滴加显色。配制好的DAB工作液需在2小时内使用,如出现沉淀,使用前先混匀。

操作步骤：

1、对于组织切片或细胞样品或膜， 在与辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后， 用适当洗涤液洗涤3-5次， 每次3-5分钟。对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。

2、最后一次洗涤完毕后，去除洗涤液，加入适量DAB染色工作液，确保能充分覆盖样品。

3、室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。

4、去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应。

5、对于组织切片或细胞样品， 显色反应终止后， 如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色， 以便于观察。 对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。

【注意事项】

1、DAB对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。如接触到眼睛或者黏膜等敏感区域，请立即用大量清水冲洗。

2、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。